JEM100CXII型透射电镜自操作简明教程
(edited by 闫阳,revised by 李鲲鹏,李茵茵)
1、 开循环水:打开循环水房空调。确定循环水温度在18.9度左右。
2、 检查电镜状态:确定左上面板的灯丝电流FILAMENT EMISSION是否归零,Condenser旋钮是否归零,镜筒上的样品杆是否拔出,物镜光栏是否退出,观察屏盖子是否盖上,目镜上挡盖是否盖上,是否处于Low Mag模式。如果上述任何一项为否,请在登记本上登记。
3 、开机:将左上面板的power的key旋转至start,然后自动弹回on。等待控制板4个指示灯变亮,分别是DP、HIGH、CAMERA和READY灯。时间大约40分钟。
4 、开LENS:打开左下面板,把LENS开关拨至ON位置。注意不可碰旁边的GUN SHIFT ON,这是抬电子枪的,只在维修时用到。
5、 升高压:按下左上面板的HT按钮,即加高压,一般默认电压为100KV。正常情况下按钮上的灯会亮,如果灯不亮,通知值班老师。打开左上面板右上角的开关METER LIGHT,等待指示仪表中的BEAM CURRENT稳定。如果长时间用低压再用高压时会升不上去,而且可以通过其他方式增加散射反差,所以不必降低电压。
6、 加样品:将样品杆从盒子里连架子取出放在桌上。左手握紧杆左面的黑色塑料柄,右手用镊子弯处向两边推开样品杆尖端的两个挡盖。注意手不要碰到中间的金属杆,以免污染镜筒。将铜网样品放在凹槽处,将挡盖合上。电镜定义靠近尖端为1号样品,靠近柄端为2号样品,注意记录对应样品编号。
7、 插入样品杆:确定FILAMENT EMISSION是否为零,左上面板的样品雷达是否处于中央,旋转观察屏右方的白色大转盘移至中央。插样品杆时使C面向自己,将杆垂直镜筒插入并顶住,直至红灯变亮且听到抽气声。等待红灯灭后,将样品杆顺时针旋转90度,直到和C连在一起的另一条直线面对自己。等待5分钟抽真空。
8、 加灯丝电流:确定BEAM CURRENT稳定。缓慢旋转FILAMENT EMISSION旋钮至STOPPER,注意不要使劲,否则STOPPER位置可能移动,后果严重。同时观察BEAM CURRENT是否缓慢增加,如果跳至250刻度,马上将FILAMENT EMISSION旋回零刻度。
9、 选择铜网孔:Low Mag模式下,在屏幕中观察到的网状亮斑为铜网的网孔。旋转更换1、2号样品的旋钮,同时旋转右边的手柄(白色转盘),使屏幕中央的黑点正对所选网孔。负染样品不能十分透亮也不能十分黑,切片样品选择完整(没有破洞)的切片中央区域。注意:旋转手柄时,要时刻注意样品雷达是否到达边缘,严禁超出雷达范围内。
10 、观察样品:按下右上面板的Mag按钮。调节右上面板的magnification旋钮,选择适当倍数。
倍数参考:
细胞或菌 约Mag: 5K
细胞器 约Mag: 20K
病毒 约Mag: 50K-100K
加2号或者3号物镜光栏,可提高散射反差和保护样品不被击穿,注意加载和退出光栏的手法。旋转左上面板的Condenser大旋钮至1点半钟位置。旋转Condenser小旋钮,直至光斑刚好比屏幕小,观察光斑是否处于中央,分别调节屏幕两旁的ALIGNMENT,注意使用最上层旋钮,不能使用粘有特殊标记的下层旋钮。如果光斑不是圆的,通知值班老师。再次旋转Condenser小旋钮,直至亮度适中。旋转白色大转盘,即可移动样品进行观察。
如果没法找到样品,将样品雷达居中,Condenser大旋钮旋至零,退出物镜光栏,换到LowMag模式。选择一个新的网孔区域,再按观察样品步骤重新观察。
11、 使用目镜观察:按下右上面板的最左上角的按钮,屏幕中间的挡板会升起至一定角度。移动需要观察的样品至挡板中央黑点正上方的另一黑点处。取下目镜上的保护盖放好,把目镜旋至对准屏幕。调节瞳距,使两个黑点重合,不能重合的只用一只眼睛观察。调节目镜焦距,直至黑点清晰。目镜放大倍数为10倍。
12、 调焦:右上面板的FOCUS:MEDIUM粗调,FINE细调,原则上先粗调再微调,一般来说1万倍以下用粗调组旋钮,1万至5万倍调至FINE下层旋钮,5万倍以上才用到FINE上层旋钮。寻找一个边缘清晰的标记物,将右上面板的IMAGE WOBBLER拨至ON,调节focus至无重影为正焦,然后再逆时针调一格至稍欠焦。高倍下上述WOBBLER法并不精确,需要用到菲涅尔条纹法,在目镜中选择大小适合的小孔,调节Focus使孔边缘出现黑或白色的菲涅尔条纹,黑白条纹之间为正焦,然后再逆时针调一格至稍欠焦。
13 、照相:放下挡板,在方框内选择拍照区域,选择合适倍数。调焦。调焦时可能会移动样品位置,放下挡板,再确认一次拍照区域是否正确。Condenser小旋钮顺时针方向旋至右上面板的EXPOSURE的红灯变绿灯。按右面板FILM advance,进底片。按升降挡板下面一个按钮,打开快门拍照。注意拍摄时要保持安静,不能走动,身体不能接触电镜机身。每拍一张底片记录一次底片编号、放大倍数、拍照内容和剩余底片数。当剩余底片数为1时,必须停止拍照,立刻通知值班老师。
14 、切换1、2号样品:样品雷达居中,Condenser大旋钮旋至零,退出物镜光栏,换到LowMag模式。旋转镜筒左边的与样品杆齐平的旋钮切换1、2号样品。
15 、取出样品杆。关掉FILAMENT EMISSION(千万不要忘记),样品雷达居中,Condenser大旋钮归零,退出物镜光栏,换到LowMag模式。垂直镜筒拔样品杆,逆时针旋转90度,使C面向自己,再拔出样品杆。
16、 关机:确定FILAMENT EMISSION归零,样品雷达居中,Condenser大旋钮归零,拔出样品杆,退出物镜光栏,盖上观察屏盖子和目镜上挡盖,LowMag模式。关HT,LENS,最后将POWER旋到OFF。等待电镜所有指示灯熄灭后(大约15分钟),关循环水和空调。
17 、更换底片:底片最好使用新电镜预抽室预抽真空至少8小时,否则更换底片需要1-2小时的抽真空时间。注意:打开照相室的门前确定FILAMENT EMISSION已归零。
18、 合轴。
1—3合轴:
a) SPOT SIZE初始为2,打开屏幕盖看到光斑,ALIGNMENT调节光斑的移动。里面小的钮TRANS控制平移,外面大的TILT控制倾斜,一般不动这个钮。 在屏幕中看到两个黑点,当底板放平时下面黑点在光斑中间,用右手侧的绿
色按钮将底板抬起上面的黑点在视野的中间。调CONDENSER可控制光标大小,旋到某处时光斑最小,使光斑居中是要达到黑点为最小光斑的圆心。
b) 将SPOT SIZE调到3,调ALIGNMENT居中;
c) 将SPOT SIZE调到1,打开右下面面板,调Gun Alightment Trans的两钮调居中;
d) 往复进行b,c两步,直至在1—3之间调整时光斑均居中为止。
注:METER LIGHT 标尺背景灯;
JEM2010型透射电镜开机操作
1 开循环水。由于新电镜循环水不关,这步可省。但要注意水温是否正常。
2 打开电源开关。IN/OUT。从来都是开着的,这步也可省。
3 开LENS ,即开灯丝,将开关稍向外拉再抬上即开。
4 按下HT。确定BEAM CURRENT稳定,只需看一下表中数值是否稳定即可。
电流是电压的一半加一或一半加二。
5 升高压。120—200Kv,用左边的钮设定。在屏幕上加电压,打开键盘输入run
回车;出现HT start,输120回车; 出现HT stop,输160回车。如此三次加高
压到200kv。Total time,输10min;HT step,输10。
6 其他钮所示含义:
MAG 放大倍数
Current density 束斑电子密度
Exp time 曝光时间
Specimen 样品位置,尽量让X Y接近0,但在+/- 100均可以。
Brightness 束斑大小(旧:condenser)
Shift 光斑平移(旧:Aignment-trans)
Spot size 1—4 或 1—5 合轴(旧:1—3 合轴)
Object focus 物镜聚焦